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　　牛角膜渾濁和滲透性（Bovine Corneal Opacity and Permeability，BCOP）試驗(yàn)是經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）認(rèn)可的眼刺激試驗(yàn)的替代方法之一，適用于識(shí)別嚴(yán)重和非常嚴(yán)重的眼刺激性的物質(zhì)，以及準(zhǔn)確分類無刺激性或嚴(yán)重刺激性物質(zhì)，即處于刺激譜兩端的結(jié)果，然而該方法還未被證明可以準(zhǔn)確區(qū)分輕微和中等刺激（GSH的2B和2A類）。

　　作為第三方檢測中心，中科測試機(jī)構(gòu)擁有CMA和CNAS認(rèn)證檢測資質(zhì)，檢測設(shè)備齊全，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，可出具國家認(rèn)可的化妝品眼刺激性試驗(yàn)報(bào)告。

　　化妝品眼刺激性試驗(yàn)

　　角膜細(xì)胞的特征是有絲狀肌動(dòng)蛋白在活細(xì)胞中保持聚合，一旦ATP再生停止會(huì)迅速解聚。在離體的牛角膜中，已固定活細(xì)胞的絲狀肌動(dòng)蛋白可被羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色來標(biāo)記。

　　同時(shí)，有研究表明，物質(zhì)的眼刺激性程度與損傷深度（depth of injury，DOI）直接相關(guān)，可依據(jù)損傷深度來對(duì)眼刺激性進(jìn)行分類。

　　BCOP方法用于化妝品眼刺激性評(píng)價(jià)主要通過鬼筆環(huán)肽對(duì)角膜冰凍切片的完整絲狀肌動(dòng)蛋白骨架染色來進(jìn)行標(biāo)記，進(jìn)而明確暴露于受試物后的牛角膜的上皮和基質(zhì)損傷深度，對(duì)損傷深度進(jìn)行量化，進(jìn)而對(duì)輕微和中等刺激進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)分。

　　BCOP試驗(yàn)方法

　　選用完好的角膜（無肉眼可見混濁、劃痕和其他異常情況），取角膜時(shí)保留2~3mm的鞏膜邊緣以便于后續(xù)處理，小心注意避免損傷角膜上皮和內(nèi)皮。分離的角膜安裝在特殊設(shè)計(jì)的角膜固定器中，角膜固定器包括前室和后室，連接處分別是角膜的上皮和內(nèi)皮。兩腔室內(nèi)都充滿了預(yù)熱的MEM培養(yǎng)液，確保沒有氣泡。在（32±1）℃培養(yǎng)箱中平衡1h后，更換前后室培養(yǎng)液測量初始濁度值。

　　分組后移除前室培養(yǎng)液后加入750mL受試物。暴露10min后，用MEM沖洗至樣品無殘留后，加滿無酚紅MEM培養(yǎng)液后暴露2h。將前后室培養(yǎng)液換新后讀取終末濁度值。移除前室培養(yǎng)液，加入1mL的4mg/mL熒光素鈉溶液，孵育90min后，收集后室液體，混勻后取360L在490nm波長處讀取吸光度值，按公式計(jì)算體外刺激評(píng)分值（in vitro irritancy score，IVIS ）。

　　每個(gè)樣品平行6只角膜，陰性對(duì)照：純化水，陽性對(duì)照：無水乙醇，3只角膜在完成BCOP測試后用于計(jì)算IVIS，另外3只角膜在后暴露完成后用于固定染色。按照0ECD指南標(biāo)準(zhǔn)：IVIS≤3，為無刺激性（GSH的不分類級(jí)別）；355，為嚴(yán)重刺激（CSH的1類）。

　　Draize試驗(yàn)方法

　　參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中“急性眼刺激性/腐蝕性”項(xiàng)下所示方法，實(shí)驗(yàn)前24 h肉眼檢查后，再用熒光素鈉及裂隙燈對(duì)雙眼進(jìn)行檢查：每個(gè)樣品取沒有眼病的健康家免3只，將0.1mL的樣品加入一側(cè)結(jié)膜囊中，眼閉合1s，至第30s時(shí)用足量流速較快但又不會(huì)引起動(dòng)物眼損傷的水流沖洗30s，另側(cè)眼睛不處理作自身對(duì)照，在滴入受試物后1，24，4872 h以及第4和7天對(duì)動(dòng)物眼睛進(jìn)行檢查。

　　如果72h未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，即可終止試驗(yàn)。對(duì)于7d不恢復(fù)者，需延長觀察時(shí)間，一般不超過21d。按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）要求判定受試物對(duì)眼的刺激強(qiáng)度。