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    稀釋法是體外定量測(cè)定抗菌藥物抑制待測(cè)菌生長(zhǎng)活性的方法。根據(jù)稀釋培養(yǎng)基的不同，分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。瓊脂稀釋法是細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。稀釋法所測(cè)得的某抗菌藥物抑制待測(cè)菌生長(zhǎng)的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC），稀釋法也可測(cè)定最小殺菌濃度（MBC）。

    作為第三方檢測(cè)中心，中科檢測(cè)機(jī)構(gòu)擁有CMA和CNAS認(rèn)證檢測(cè)資質(zhì)，檢測(cè)設(shè)備齊全，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，可出具國(guó)家認(rèn)可的細(xì)菌藥敏試驗(yàn)報(bào)告。

    稀釋法測(cè)定原理

    以水解酪蛋白（M-H）液體培養(yǎng)基將抗菌藥作不同濃度的稀釋，然后接種待測(cè)菌，定量測(cè)定抗菌藥物抑制該菌的最低濃度（MIC）或殺死該菌的最低（或最?。⒕鷿舛龋∕BC）。

    稀釋法測(cè)定材料

    （1） 抗菌藥物原液的配制：配制各種抗菌藥物原液的溶劑一般為蒸餾水、磷酸鹽緩沖液或乙醇等，穰釋劑多為蒸餾水。配制時(shí)需用標(biāo)準(zhǔn)粉劑并了解其效力（效價(jià)），用下列公式計(jì)算配制抗菌藥物原液一定濃度所需要標(biāo)準(zhǔn)粉劑的毫克數(shù)。

    A：稱取標(biāo)準(zhǔn)粉劑的毫克數(shù)

    B：稀釋劑的毫升數(shù)

    C：貯存液的濃度（即原液濃度，U/ml或μg/ml）

    D：標(biāo)準(zhǔn)粉劑的有效力（即效價(jià)，U/mg或μg/mg）

    最后，原液以過(guò)濾法除菌，小量分裝使用。大部分抗菌藥物原液在-20℃以下可保存三個(gè)月，而在4℃以下只能保存一周。

    （2）培養(yǎng)基：一般細(xì)菌采用M-H液體培養(yǎng)基；鏈球菌和嗜血桿菌屬除培養(yǎng)基為液體外，其他需補(bǔ)充的成分均同K-B法。

    （3）接種菌液的制備：在已分純的待測(cè)菌平板上挑取4～5個(gè)形態(tài)相同的菌落接種于3～5ml M-H液體培養(yǎng)基內(nèi)，35℃培養(yǎng)4～6h；鏈球菌屬和嗜血桿菌屬的細(xì)菌需接種于含血液的M-H液體培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)過(guò)夜，校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，再用M-H液體培養(yǎng)基按1：200稀釋后備用。稀釋后的菌液應(yīng)在15min內(nèi)接種。

    稀釋法實(shí)驗(yàn)步驟

    （1）排列試管10～15支，除第一支外，每管加人M-H液體培養(yǎng)基lml。

    （2）先吸取抗菌藥物原液（1000μg/ml）5.12ml加入液體4.88m1中，混合，吸出分別加入第一管和第二管中，每管1ml，第二管經(jīng)混合后吸出1ml，加入第三管中，依次類推至第十五管后，吸出1ml棄去，這樣各管抗菌藥物的最終含量依次為512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.13、0.06、0.03μg/ml。另設(shè)培養(yǎng)液對(duì)照，檢測(cè)菌生長(zhǎng)對(duì)照和質(zhì)控菌生長(zhǎng)對(duì)照管各一支。

    （3）將已校正濃度的待測(cè)菌懸液依次加入含藥管內(nèi)，每管0.05ml，混勻。各試管置35℃培養(yǎng)12～18h后觀察結(jié)果。每次以同法作對(duì)照菌的藥敏試驗(yàn)。

    稀釋法結(jié)果判讀：

    最低抑菌濃度（MIC）：凡無(wú)肉眼可見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度即為該待測(cè)菌MIC。

    最低殺菌濃度（MBC）：再以0.01ml容量接種環(huán)取肉眼觀察認(rèn)為無(wú)菌生長(zhǎng)的試管移種一環(huán)于血瓊脂平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35℃培養(yǎng)過(guò)夜后觀察最低藥物濃度能殺死99.9%原始種入的細(xì)菌即為該菌的MBC。

    稀釋法影響結(jié)果的因素

    （1）培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的pH、滲透壓及電解質(zhì)對(duì)MIC和MBC均有影響。

    （2）抗菌藥物：抗菌藥物必須采用標(biāo)準(zhǔn)粉劑。配好的藥物原液應(yīng)在有效期內(nèi)使用。

    （3）結(jié)果觀察時(shí)間：16～18h觀察，有的細(xì)菌在20～24h觀察。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，被輕度抑制的部分細(xì)菌可重新開(kāi)始生長(zhǎng)；另外由于某些抗菌藥物不夠穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)使其抗菌活性降低，甚至消失，從而使MIC值增高。

    稀釋法測(cè)定質(zhì)量控制

    每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)待測(cè)菌的不同而分別選用：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212和銅綠假單胞菌ATCC27853等標(biāo)準(zhǔn)菌株在同-試驗(yàn)條件下作平行試驗(yàn)，常用抗菌藥物對(duì)這些標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC應(yīng)在預(yù)期值范圍內(nèi)。超過(guò)或低于預(yù)期值范圍一個(gè)稀釋度以上，不應(yīng)向臨床發(fā)出報(bào)告，應(yīng)檢查出現(xiàn)差錯(cuò)的原因以及標(biāo)準(zhǔn)菌株被污染和變異的可能性。

    稀釋法殺菌試驗(yàn)

    臨床實(shí)驗(yàn)室常用的定量評(píng)價(jià)抗菌藥物殺菌效力的試驗(yàn)主要包括最低殺菌濃度（MBC）試驗(yàn)和殺菌曲線法。

    ①最低殺菌濃度　最低殺菌濃度是某抗菌藥物能殺滅99.9%以上的測(cè)試菌量的最低藥物濃度。測(cè)定方法就是稀釋法MIC測(cè)定的基礎(chǔ)上通過(guò)再轉(zhuǎn)種、再孵育，最終測(cè)得某種抗菌藥物對(duì)被測(cè)菌的MBC。

    ②時(shí)間-殺菌曲線 時(shí)間-殺菌曲線主要用于評(píng)價(jià)一種抗菌藥物對(duì)測(cè)試菌的殺菌速率，以及兩種或兩種以上抗菌藥物對(duì)測(cè)試菌的聯(lián)合殺菌活性。操作時(shí)培養(yǎng)基和測(cè)試菌的準(zhǔn)備等與測(cè)定MIC的肉湯稀釋法相同，設(shè)定0h、4h、8h、24h等不同培養(yǎng)時(shí)間的試驗(yàn)管，對(duì)每個(gè)管均設(shè)立生長(zhǎng)對(duì)照管，每個(gè)試驗(yàn)管在到達(dá)孵育時(shí)間后，立即連同生長(zhǎng)對(duì)照管轉(zhuǎn)種血平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。最后將各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的平均菌落計(jì)數(shù)在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制殺菌曲線。